ISO 20776-1:2006

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20776-1
First edition
2006-11-15

Clinical laboratory testing and in vitro
diagnostic test systems — Susceptibility
testing of infectious agents and
evaluation of performance of
antimicrobial susceptibility test
devices —
Part 1:
Reference method for testing the in vitro
activity of antimicrobial agents against
rapidly growing aerobic bacteria involved
in infectious diseases
Systèmes d'essais en laboratoire et de diagnostic in vitro — Essais de
réceptivité d'agents infectieux et évaluation des performances des
dispositifs de réceptivité antimicrobienne —
Partie 1: Méthode de référence pour la détermination de la sensibilité in
vitro aux agents microbiens des bactéries aérobies à croissance rapide
impliquées dans les maladies infectieuses




Reference number
ISO 20776-1:2006(E)
©
ISO 2006

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ISO 20776-1:2006(E)
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Published in Switzerland

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ISO 20776-1:2006(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Terms and definitions. 1
3 Test procedures . 4
3.1 General. 4
3.2 Medium . 4
3.3 Antimicrobial agents . 4
3.4 Preparation of inoculum . 9
3.5 Inoculation of microdilution trays. 10
3.6 Incubation of microdilution trays. 10
3.7 Reading results . 10
3.8 Special test situations where the MIC result might give unreliable results . 10
4 Quality control. 11
Annex A (normative) Requirements for Mueller-Hinton broth. 16
Bibliography . 18

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ISO 20776-1:2006(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 20776-1 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee
CEN/TC 140, In vitro diagnostic medical devices, in collaboration with Technical Committee ISO/TC 212,
Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
ISO 20776 consists of the following parts, under the general title Clinical laboratory testing and in vitro
diagnostic test systems — Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of
antimicrobial susceptibility test devices:
⎯ Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing
aerobic bacteria involved in infectious diseases
⎯ Part 2: Evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices
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ISO 20776-1:2006(E)
Introduction
In vitro susceptibility tests are performed on microorganisms suspected of causing disease, particularly if the
organism is thought to belong to a species that may exhibit resistance to frequently used antimicrobial agents.
The tests are also important in resistance surveillance, epidemiological studies of susceptibility and in
comparisons of new and existing agents.
Dilution procedures are used to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) of antimicrobial
agents and are the reference method for antimicrobial susceptibility testing. MIC methods are used in
resistance surveillance, comparative testing of new agents, to establish the susceptibility of organisms that
give equivocal results in routine tests, for tests on organisms where routine tests may be unreliable and when
a quantitative result is required for clinical management. In dilution tests, microorganisms are tested for their
ability to produce visible growth on a series of agar plates (agar dilution) or in broth (broth dilution) containing
serial dilutions of the antimicrobial agent.
The lowest concentration of an antimicrobial agent (in mg/l) that, under defined in vitro conditions, prevents
the appearance of visible growth of a microorganism within a defined period of time is known as the MIC. The
MIC is a guide for the clinician to the susceptibility of the organism to the antimicrobial agent and aids
treatment decisions. Careful control and standardisation is required for intra- and inter-laboratory
reproducibility, as results may be significantly influenced by the method used. It is generally accepted that
broth MIC tests are reproducible to within one doubling dilution of the real end point (i.e. ± one well or tube in
a doubling dilution series).
Broth dilution is a technique in which containers holding identical volumes of broth with antimicrobial agent
solutions in incrementally (usually geometrically) increasing concentrations are inoculated with a known
number of microorganisms.
Broth microdilution denotes the performance of the broth dilution test in microdilution trays.
The method described in this part of ISO 20776 is intended for the testing of pure cultures of aerobic bacteria
that are easily grown by overnight incubation on agar and grow well in Mueller-Hinton broth, which may be
supplemented. The broth microdilution method described in this part of ISO 20776 is essentially the same as
[1] [2] [3] [4]
those used in many countries, including France , Germany , Sweden , the United Kingdom , and the
[5]
United States . The method is also essentially the same as the broth microdilution method published by the
[6]
European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) . All these methods are based on
[7]
those described by Ericsson and Sherris .

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 20776-1:2006(E)

Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test
systems — Susceptibility testing of infectious agents and
evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test
devices —
Part 1:
Reference method for testing the in vitro activity of
antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria
involved in infectious diseases
WARNING — The use of this part of ISO 20776 may involve hazardous materials, operations and
equipment. This part of ISO 20776 does not purport to address all of the safety problems associated
with its use. It is the responsibility of the user of this part of ISO 20776 to establish appropriate safety
and health practices and determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 20776 describes one reference method, broth microdilution, for determination of MICs. The
MIC reflects the activity of the drug under the described test conditions, and can be interpreted for clinical
management purposes by taking into account other factors, such as drug pharmacology or bacterial
resistance mechanisms. This allows categorization of bacteria as “susceptible” (S), “intermediate” (I), or
“resistant” (R). In addition, MIC distributions can be used to define wild type or non-wild type bacterial
populations. Although clinical interpretation of the MIC value is beyond the scope of this part of ISO 20776,
modifications of the basic method are required for certain antimicrobial agent - bacteria combinations to
facilitate clinical interpretation. These modifications are included in a separate table. It is advisable to compare
other susceptibility testing methods (e.g. routine methods or diagnostic test devices) with this reference
method for validation, in order to ensure comparable and reliable results.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
antimicrobial agent
substance of biological, semi-synthetic or synthetic origin that inhibits the growth of or kills bacteria, and is
thus of potential use in the treatment of infections
NOTE Disinfectants, antiseptics and preservatives are not included in this definition.
2.2 Antimicrobial agents — properties
2.2.1
potency
antimicrobially active fraction of a test substance, determined in a bioassay against a reference powder of the
same substance
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ISO 20776-1:2006(E)
NOTE The potency is expressed as mass fraction in milligrams per gram (mg/g), or as activity content in International
Units (IU) per gram, or as a volume fraction or mass fraction in percent, or as an amount-of-substance concentration
(mass fraction) in mole per litre of ingredients in the test substance.
2.2.2
concentration
amount of an antimicrobial agent in a defined volume of liquid
NOTE 1 The concentration is expressed as mg/l.
NOTE 2 mg/l ≡ µg/ml but it is not recommended to use the unit µg/ml.
2.3
stock solution
initial solution used for further dilutions
2.4
minimum inhibitory concentration
MIC
lowest concentration that, under defined in vitro conditions, prevents visible growth of bacteria within a defined
period of time
NOTE The MIC is expressed in mg/l.
2.5
breakpoint
BP
specific values of parameters, such as MICs, on the basis of which bacteria can be assigned to the clinical
categories “susceptible”, “intermediate” and “resistant”
NOTE For current interpretive breakpoints, reference can be made to the latest publications of organizations
employing this reference method (e.g. CLSI and EUCAST).
2.5.1
susceptible
S
bacterial strain inhibited in vitro by a concentration of an antimicrobial agent that is associated with a high
likelihood of therapeutic success
NOTE 1 Bacterial strains are categorized as susceptible by applying the appropriate breakpoints in a defined
phenotypic test system.
NOTE 2 This breakpoint can be altered due to changes in circumstances (e.g. changes in commonly used drug
dosages, emergence of new resistance mechanisms).
2.5.2
intermediate
I
bacterial strain inhibited in vitro by a concentration of an antimicrobial agent that is associated with uncertain
therapeutic effect
NOTE 1 Bacterial strains are categorized as intermediate by applying the appropriate breakpoints in a defined
phenotypic test system.
NOTE 2 This class of susceptibility implies that an infection due to the isolate can be appropriately treated in body sites
where the drugs are physiologically concentrated or when a high dosage of drug can be used.
NOTE 3 This class also indicates a “buffer zone”, to prevent small, uncontrolled, technical factors from causing major
discrepancies in interpretations.
NOTE 4 These breakpoints can be altered due to changes in circumstances (e.g. changes in commonly used drug
dosages, emergence of new resistance mechanisms).
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ISO 20776-1:2006(E)
2.5.3
resistant
R
bacterial strain inhibited in vitro by a concentration of an antimicrobial agent that is associated with a high
likelihood of therapeutic failure
NOTE 1 Bacterial strains are categorized as resistant by applying the appropriate breakpoints in a defined phenotypic
test system.
NOTE 2 This breakpoint can be altered due to changes in circumstances (e.g. changes in commonly used drug
dosages, emergence of new resistance mechanisms).
2.6
wild type
absence of acquired resistance mechanisms to the antimicrobial agent for a given strain
2.7
reference strain
catalogued, characterized bacteria with stable, defined antimicrobial susceptibility phenotypes and/or
genotypes
NOTE Reference strains are kept as stock cultures, from which working cultures are derived. They are obtainable
from culture collections and used for quality control.
2.8 Susceptibility testing method
2.8.1
broth dilution
technique in which containers are filled with appropriate volumes of an antimicrobial solution, employing
incrementally (usually two-fold) increasing concentrations of the antimicrobial agent and appropriate volumes
of broth with a defined inoculum
NOTE The aim of this method is the determination of the MIC.
2.8.2
microdilution
performance of broth dilution in microdilution trays with a capacity of u 200 µl per well
2.9
broth
fluid medium used for the in vitro growth of bacteria
2.10
inoculum
number of bacteria in a suspension, calculated with respect to the final volume
NOTE The inoculum is expressed as colony-forming units per millilitre (CFU/ml).
2.11
inoculum effect
change in MIC related to change in inoculum
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ISO 20776-1:2006(E)
3 Test procedures
3.1 General
The tests are performed in microdilution trays. The method is based on the preparation of antimicrobial agent
working solutions, either in 50 µl volumes per well (with the addition of an inoculum also in a volume of 50 µl),
or in a volume of 100 µl per well (with the addition of a maximum of 5 µl inoculum volume).
3.2 Medium
Mueller-Hinton broth shall be used (see Annex A for details).
3.3 Antimicrobial agents
3.3.1 General
Antimicrobial agents shall be obtained directly from the manufacturer or from reliable commercial sources;
pharmaceutical preparations for clinical use are not acceptable. The antimicrobial agents shall be supplied
with a lot number, potency, an expiry date and details of recommended storage conditions. Substances shall
be stored in tightly closed containers in the dark, at 4 °C to 8 °C, with a desiccant unless otherwise
recommended by the manufacturer. Hygroscopic agents should be dispensed into aliquots, one of which is
used on each test occasion.
Allow containers to warm to room temperature before opening them to avoid condensation.
3.3.2 Preparation of stock solutions
The use of a calibrated analytical balance is required to weigh antimicrobial agents. Allowance for the potency
of the powder shall be made by use of the following formula to obtain the amount of antimicrobial agent
substance or the volume of diluent needed for a standard solution:
V×ρ
m= (1)
P
mP×
V= (2)
ρ
where
ρ is the concentration of the stock solution, in mg/l;
m is mass of the antimicrobial agent (powder), in g;
P is the potency of the antimicrobial agent (powder), in mg/g;
V is the volume of diluent, in l.
Concentrations of stock solutions should be 1 000 mg/l or greater, although the solubility of some agents is a
limiting factor. The actual concentrations of stock solutions depend on the method of preparing working
solutions (serial dilutions). Agents should be dissolved and diluted in sterile distilled water unless the
manufacturer states otherwise. Some agents require alternative solvents (see Table 1). Sterilisation of
solutions is not usually necessary. If required, sterilisation should be done by membrane filtration, and
samples before and after sterilisation should be compared by assay to ensure that adsorption has not
occurred.
Unless information is available on stability of stock solutions under specified storage conditions, they should
be prepared fresh for each test batch.
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ISO 20776-1:2006(E)
Table 1 — Examples of solvents and diluents for making stock solutions of selected
antimicrobial agents
Antimicrobial agent Solvent Diluent
Amikacin Water
Amoxicillin Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Ampicillin Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 8,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
a
Azithromycin Ethanol volume fraction 95 % or glacial acetic acid Water
Azlocillin Water
Aztreonam Saturated sodium bicarbonate solution Water
Carbenicillin Water
Cefaclor Water
Cefamandole Water
Cefazolin Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Cefdinir Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Water
Cefditoren Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Water
Cefepime Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Cefetamet Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Water
Cefixime Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 7,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 7,0
Cefmetazole Water
Cefonicid Water
Cefoperazone Water
Cefotaxime Water
Cefotetan Dimethyl sulfoxide Water
Cefoxitin Water
Cefpodoxime Mass concentration 0,1 % sodium bicarbonate solution Water
Cefprozil Water
Ceftazidime Saturated sodium bicarbonate solution Water
Ceftibuten 1/10 volume of dimethyl sulfoxide Water
Ceftizoxime Water
b
Ceftobiprole Dimethyl sulfoxide plus glacial acetic acid Water, vortex vigorously
Ceftriaxone Water
Cefuroxime Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Cephalothin Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Water
Chloramphenicol Ethanol volume fraction 95 % Water
Cinoxacin Half volume of water, a minimum volume 1 mol/l NaOH Water
to dissolve, then make up to total volume with water
Ciprofloxacin Water
a
Clarithromycin Methanol or glacial acetic acid 0,1 mol/l phosphate buffer, pH 6,5
Clavulanic acid Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Clinafloxacin Water
Clindamycin Water
c
Colistin Water Water
d
Dalbavancin Dimethyl sulfoxide Water and dimethyl sulfoxide

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ISO 20776-1:2006(E)
Table 1 (continued)
Antimicrobial agent Solvent Diluent
Daptomycin Water Water
a
Dirithromycin Glacial acetic acid Water
Doripenem NaCl volume fraction 0,85 % NaCl volume fraction 0,85 %
Doxycycline Water
Enoxacin Half volume water, a minimum volume 0,1 mol/l NaOH Water
to dissolve, then make up to total volume with water
Ertapenem Phosphate buffer 0,01 mol/l, pH 7,2 Phosphate buffer 0,01 mol/l, pH 7,2

a
Erythromycin Ethanol volume fraction 95 % or glacial acetic acid Water
Faropenem Water Water
Fleroxacin Half volume water, a minimum volume 0,1 mol/l NaOH Water
to dissolve, then make up to total volume with water
Fusidic acid Ethanol volume fraction 95 % Water
Garenoxacin Water (with stirring)
Gatifloxacin Water (with stirring)
Gemifloxacin Water
Gentamicin Water
Imipenem Phosphate buffer 0,01 mol/l, pH 7,2 Phosphate buffer 0,01 mol/l, pH 7,2
Kanamycin Water
Levofloxacin Half volume water, a minimum volume 1 mol/l NaOH to Water
dissolve, then make up to total volume with water
Linezolid Water
Loracarbef Water
Mecillinam Water
Meropenem Phosphate buffer 0,01 mol/l, pH 7,2 Phosphate buffer 0,01 mol/l, pH 7,2
Methicillin Water
Mezlocillin Water
Minocycline Water
Moxalactam 0,04 mol/l HCI (let sit for 1,5 h to 2 h) Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0

e
(diammonium salt)
Moxifloxacin Water
Mupirocin Water
Nafcillin Water
Nalidixic acid Half volume water, a minimum volume 1 mol/l NaOH to Water
dissolve, then make up to total volume with water
Netilmicin Water
Nitrofurantoin Minimum volume dimethylformamide to dissolve, then Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 8,0
make up to total volume with phosphate buffer 0,1 mol/l,
pH 8,0
Norfloxacin Half volume of water, a minimum volume 1 mol/l NaOH Water
to dissolve, then make up to total volume with water
Ofloxacin Half volume water, a minimum volume 1 mol/l NaOH to Water
dissolve, then make up to total volume with water
Oxacillin Water

6 © ISO 2006 – All rights reserved

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ISO 20776-1:2006(E)
Table 1 (continued)
Antimicrobial agent Solvent Diluent
Penicillin Water
Piperacillin Water
Polymyxin B Water Water
Quinupristin-Water
dalfopristin
Rifampicin Methanol Water
Sparfloxacin Water
Sulbactam Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Sulphonamides Half volume water, a minimum volume 1 mol/l NaOH to Water
dissolve, then make up to total volume with water
Teicoplanin Water
Telavancin Dimethyl sulfoxide Water

a
Telithromycin Glacial acetic acid Water
Tetracycline Water
Ticarcillin Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0 Phosphate buffer 0,1 mol/l, pH 6,0
Tigecycline Water Water
Tobramycin Water
Trimethoprim Half volume water, a minimum volume 0,1 mol/l lactic Water
acid or 0,1 mol/l HCl to dissolve, then make up to total
volume with water
Trimethoprim (if
Water
lactate)
Trospectomycin Water
Vancomycin Water
NOTE 1 The information regarding solvents and diluents in Table 1 was largely obtained from GLSI document M100-S16
[7]
(Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Sixteenth Informational Supplement) with permission. This
information is subject to periodic updates. Check the latest version of M100 available from CLSI (formerly NCCLS), 940 West Valley

Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087, USA.
NOTE 2 For further information on examples of solvents and diluents for making stock solutions of selected antimicrobial agents,
consult the European Pharmacopoeia or the US Pharmacopoeia.
a
For glacial acetic acid, use half volume of water, then add glacial acetic acid dropwise until dissolved, not to exceed 2,5 mg/l; add
water to full volume. Glacial acetic acid is equivalent to acetic acid volume fraction > 99 %.
b
For each 1,5 mg ceftobiprole, add 110 µl of a 10:1 mixture of dimethyl sulfoxide and glacial acetic acid. Vortex vigorously for 1 min,
then intermittently for 15 min. Dilute to 1,0 ml with distilled water.
c
The formulation of colistin used in antimicrobial susceptibility tests is colistin sulphate and not colistin methane sulfphonate
(sulphomethate).
d
Starting stock solutions of dalbavancin should be prepared at concentrations no higher than 1 600 mg/l. Intermediate 100 ×
concentrations should then be diluted in dimethyl sulfoxide. Final 1:100 dilutions should then be made directly into cation-adjusted
Mueller-Hinton broth (CAMHB) supplemented with polysorbate-80 volume fraction 0,002 % so that the final concentration of dimethyl
sulfoxide in the wells is no greater than 1 %.
e
The diammonium salt of moxalactam is very stable, but it is almost pure R isomer. Moxalactam for clinical use is a 1:1 mixture of R
and S isomers. Therefore, the salt is dissolved in 0,04 mol/l HCl and allowed to react for 1,5 h to 2 h to convert it to equal parts of both
isomers.

© ISO 2006 – All rights reserved 7

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ISO 20776-1:2006(E)
3.3.3 Preparation of working solutions
The range of concentrations selected for testing depends on the organisms and antimicrobial agent. The
chosen range shall allow full endpoint MIC determination for appropriate reference strains. A two-fold dilution
series based on 1 mg/l is prepared in Mueller-Hinton broth. Dilutions should not be prepared by serial dilution
steps, but according to the procedure outlined in Table 2. Working solutions shall be used the same day
unless information is available on stability of the solutions under specified storage conditions.
Table 2 — Preparation of working dilutions of antimicrobial agents for use in broth dilution
[8]
susceptibility tests
a
Antimicrobial agent Volume stock solution Antimicrobial agent
Volume broth
concentration in stock solution concentration obtained
mg/l ml ml mg/l
5 120 1 9 512
512 1 1 256
512 1 3 128
512 1 7 64
64 1 1 32
64 1 3 16
64 1 7 8
8 1 1 4
8 1 3 2
8 1 7 1
1 1 1 0,5
1 1 3 0,25
1 1 7 0,125
a
Broth used for dilution is that used in the susceptibility test. Any supplementation shall take place before diluting the antimicrobial
agent to maintain the required concentrations.

3.3.4 Preparation of microdilution trays
Working solutions are dispensed into microdilution trays at 50 µl per well with double the desired final
concentrations of antimicrobial agent, or at 100 µl per well in the desired final concentrations.
At least one well, containing 50 µl or 100 µl of antimicrobial agent-free medium, should be included as a
growth control for each strain tested. Likewise, a well containing 100 µl of antimicrobial agent-free medium
should be included as an uninoculated negative control well for each strain tested.
3.3.5 Storage of microdilution trays
Filled trays may be used immediately or may be stored for up to three months. For storage the filled trays
should be sealed in plastic bags and immediately placed in a freezer at u − 60 °C unless the antimicrobial
agents are known to be stable at higher temperatures.
Although the antimicrobial agents in frozen trays usually remain stable for several months, certain agents (e.g.
clavulanic acid and imipenem) are more labile than others and should be stored at u − 60 °C. Trays shall not
be stored in a self-defrosting freezer, and thawed antimicrobial solutions shall not be refrozen, as repeated
freeze-thaw cycles accelerate the degradation of some antimicrobial agents, particularly β-lactams.
8 © ISO 2006 – All rights reserved

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ISO 20776-1:2006(E)
3.4 Preparation of inoculum
3.4.1 General
Standardisation of the inoculum is essential for accurate and reproducible broth dilution susceptibility tests.
Therefore purity checks and viable colony counts shall be performed on every isolate tested with this
reference procedure.
The inoculum may be prepared by diluting a broth culture or by suspending colonies from an overnight culture
on non-selective agar medium in broth or saline. For either method, four or five colonies of a pure
non-selective nutritive agar medium a
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 20776-1
Première édition
2006-11-15
Version corrigée
2007-02-15

Systèmes d'essais en laboratoire et de
diagnostic in vitro — Sensibilité in vitro
des agents infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour
antibiogrammes —
Partie 1:
Méthode de référence pour la
détermination de la sensibilité in vitro
aux agents antimicrobiens des bactéries
aérobies à croissance rapide impliquées
dans les maladies infectieuses
Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems —
Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance
of antimicrobial susceptibility test devices —
Part 1: Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial
agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious
diseases




Numéro de référence
ISO 20776-1:2006(F)
©
ISO 2006

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Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Modes opératoires. 4
3.1 Généralités . 4
3.2 Milieu. 4
3.3 Agents antimicrobiens . 4
3.4 Préparation de l'inoculum. 10
3.5 Inoculation des plaques de microdilution.11
3.6 Incubation des plaques de microdilution.11
3.7 Résultats des lectures. 11
3.8 Situations spécifiques pour lesquelles le résultat de la CMI peut donner des résultats peu
fiables. 11
4 Contrôle de qualité . 13
Annexe A (normative) Exigences relatives au bouillon Mueller-Hinton. 17
Bibliographie . 19

© ISO 2006 – Tous droits réservés iii

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ISO 20776-1:2006(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 20776-1 a été élaborée par le comité technique CEN/TC 140, Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro,
du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité technique ISO/TC 212,
Laboratoires d'analyses de biologie médicale et systèmes de diagnostic in vitro, conformément à l'Accord de
coopération technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
L'ISO 20776 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Systèmes d'essais en
laboratoire et de diagnostic in vitro — Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des performances
des dispositifs pour antibiogrammes:
⎯ Partie 1: Méthode de référence pour la détermination de la sensiblilté in vitro aux agents antimicrobiens
des bactéries aérobies à croissance rapide impliquées dans les maladies infectieuses
⎯ Partie 2: Évaluation des performances des dispositifs pour antibiogrammes
La présente version corrigée de l'ISO 20776-1:2006 inclut les corrections suivantes:
⎯ page de titre: le titre français a été modifié;
⎯ p. iv, Avant-propos: les titres français des deux parties ont été modifiés;
⎯ Le terme «réceptivité» a été remplacé dans tout le document par le terme «sensibilité» et divers autres
changements de terminologie, d'ordre général, ont été effectués dans le document.

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ISO 20776-1:2006(F)
Introduction
Les essais de sensibilité in vitro sont conduits sur les micro-organismes suspectés de provoquer une maladie,
en particulier si l'on pense que l'organisme appartient à une espèce qui peut montrer une résistance aux
agents antimicrobiens fréquemment employés. Les essais sont également importants pour la surveillance de
la résistance, pour les études épidémiologiques de la sensibilité et pour comparer les nouveaux agents
antimicrobiens à ceux déjà existants.
Des méthodes de dilution sont employées pour déterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMI) des
agents antimicrobiens et constituent la référence pour les essais de sensibilité antimicrobienne. Les méthodes
de détermination des CMI sont employées dans la surveillance de la résistance, pour comparer l’activité des
nouveaux agents antimicrobiens, pour établir la sensibilité des organismes qui donnent des résultats
équivoques avec les méthodes de routine, dans le cadre d’essais réalisés sur des organismes pour lesquels
les méthodes de routine peuvent ne pas être fiables et lorsqu'un résultat quantitatif est nécessaire à la
décision clinique. Dans les essais de dilution, les micro-organismes sont soumis à essai afin de déterminer
leur capacité à produire une croissance visible sur une série de boîtes de gélose (dilution en gélose) ou dans
un bouillon (dilution en bouillon) contenant des dilutions en série de l'agent antimicrobien.
La concentration la plus faible d'un agent antimicrobien (en mg/l) qui, dans des conditions in vitro définies,
inhibe l'apparition d'une croissance visible d'un micro-organisme au cours d'une période définie est connue
sous le nom de CMI. Pour le clinicien, la CMI constitue un guide de la sensibilité de l'organisme à l'agent
antimicrobien et facilite les décisions de traitement. Un strict contrôle de la méthode et une normalisation sont
nécessaires à la reproductibilité intralaboratoires et interlaboratoires car les résultats peuvent être
significativement influencés par la méthode utilisée. Il est généralement accepté que les essais de la CMI en
bouillon sont reproductibles à plus ou moins une dilution (c'est-à-dire ± une cupule ou un tube dans une série
de raison 2).
La dilution en bouillon est une technique dans laquelle des conteneurs comportant des volumes identiques
de bouillon avec des solutions d'agent antibactérien à des concentrations augmentant de manière
incrémentielle (généralement de manière géométrique) sont ensemencés avec un nombre connu de
micro-organismes.
La microdilution en bouillon indique une dilution en bouillon sur des plaques de microdilution.
La méthode décrite dans ce document est conçue pour soumettre à essai des cultures pures de bactéries
aérobies qui sont facilement cultivables en bouillon Mueller-Hinton, possiblement enrichi en les incubant une
nuit dans un bouillon gélosé. La méthode de microdilution en bouillon décrite dans ce document est
[1] [2]
essentiellement la même que celles utilisées dans de nombreux pays, y compris la France , l'Allemagne ,
[3] [4] [5]
la Suède , le Royaume-Uni , et les États-Unis . La méthode est également essentiellement la même que
la méthode de microdilution en bouillon publiée par l'EUCAST (European Committee on Antimicrobial
[6] [7]
Susceptibility Testing) . Toutes ces méthodes sont basées sur la méthode décrite par Ericsson et Sherris .
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NORME INTERNATIONALE ISO 20776-1:2006(F)

Systèmes d'essais en laboratoire et de diagnostic in vitro —
Sensibilité in vitro des agents infectieux et évaluation des
performances des dispositifs pour antibiogrammes —
Partie 1:
Méthode de référence pour la détermination de la sensibilité
in vitro aux agents antimicrobiens des bactéries aérobies à
croissance rapide impliquées dans les maladies infectieuses
AVERTISSEMENT L'utilisation de la présente partie de l’ISO 20776 peut impliquer des matériaux,
des opérations et des équipement dangereux. La présente partie de l’ISO 20776 n'est pas destinée à
traiter tous les problèmes de sécurité associés à son utilisation. Il est de la responsabilité de
l'utilisateur de cette partie de l’ISO 20776 d'établir les pratiques de santé et de sécurité appropriées et
de déterminer l'applicabilité des limites réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 20776 décrit une méthode de référence, la microdilution en bouillon, pour
déterminer les CMI. La CMI reflète l'activité du médicament dans les conditions d'essai décrites, et peut être
interprétée pour une recommandation clinique en tenant compte d'autres facteurs tels que la pharmacologie
du médicament ou les mécanismes de résistance bactérienne. Cela permet de classer les bactéries comme
étant «sensibles» (S), «intermédiaires» (I), ou «résistantes» (R). En outre, les distributions de CMI peuvent
être utilisées pour définir les populations bactériennes de type sauvage ou non sauvage. Bien que
l'interprétation clinique de la valeur de la CMI se trouve au-delà du domaine d'application de la présente partie
de l’ISO 20776, des modifications de la méthode de base sont nécessaires pour certaines combinaisons
agent antimicrobien-bactérie afin de faciliter l'interprétation clinique. Ces modifications sont incluses dans un
tableau séparé. Il est recommandé de comparer les autres méthodes d'essai de sensibilité (par exemple les
méthodes conduites en routine ou les essais de diagnostic) à cette méthode de référence à des fins de
validation et pour garantir des résultats comparables et fiables.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
agent antimicrobien
substance d'origine biologique, semi-synthétique ou synthétique qui inhibe la croissance d'une bactérie ou
l'élimine, et qui est par conséquent potentiellement utilisée dans le traitement des infections
NOTE Les désinfectants, les antiseptiques et les conservateurs ne sont pas inclus dans cette définition.
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ISO 20776-1:2006(F)
2.2 Agents antimicrobiens — propriétés
2.2.1
titre
fraction d'une substance d'essai ayant une action antimicrobienne, déterminée dans le cadre d'une analyse
biologique par rapport à une poudre de référence de la même substance
NOTE Le titre est exprimé en fraction massique en milligrammes par gramme (mg/g) ou en activité en unités
internationales (UI) par g ou en fraction volumique ou en fraction massique en pourcentage ou en concentration de
quantité de substance (fraction massique) en mole par litre d'ingrédients dans la substance d'essai.
2.2.2
concentration
quantité d'un agent antimicrobien dans un volume défini de liquide
NOTE 1 La concentration est exprimée en mg/l.
NOTE 2 mg/l ≡ µg/ml mais il n'est pas recommandé d'utiliser l'unité µg/ml.
2.3
solution mère
solution initiale utilisée pour des dilutions ultérieures
2.4
concentration minimale inhibitrice
CMI
concentration la plus faible qui, dans des conditions in vitro définies, empêche la croissance visible de
bactéries pendant une période définie
NOTE La CMI est exprimée en mg/l.
2.5
concentration critique
valeurs spécifiques de CMI sur la base desquelles une bactérie peut être affectée aux catégories cliniques
«sensible», «intermédiaire» et «résistante»
NOTE Pour les concentrations critiques actuelles, se référer aux dernières publications des organisations employant
cette méthode de référence (par exemple le CLSI et l'EUCAST).
2.5.1
sensible
S
souche bactérienne inhibée in vitro par une concentration d'un agent antimicrobien qui est associée à une
forte probabilité de succès thérapeutique
NOTE 1 Les souches bactériennes sont classées «sensibles» en appliquant la concentration critique appropriée dans
un système d'essai phénotypique défini.
NOTE 2 Cette concentration critique peut être modifiée à cause de modifications des circonstances (par exemple
modifications des posologies habituelles des médicaments, émergence de nouveaux mécanismes de résistance).
2.5.2
intermédiaire
I
souche bactérienne inhibée in vitro par une concentration d'un agent antimicrobien qui est associée à un effet
thérapeutique imprévisible
NOTE 1 Les souches bactériennes sont classées «intermédiaires» en appliquant les concentrations critiques
appropriées dans un système d'essai phénotypique défini.
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ISO 20776-1:2006(F)
NOTE 2 Cette classe de sensibilité implique qu'une infection due à l'isolat peut être traitée de manière appropriée dans
les sites corporels où les médicaments sont physiologiquement concentrés ou lorsqu'une posologie plus importante peut
être utilisée.
NOTE 3 Cette classe indique également une «zone tampon» empêchant tout facteur technique, incontrôlé, de faible
importance, de provoquer des écarts d'interprétation majeurs.
NOTE 4 Ces concentrations critiques peuvent être modifiées à cause de modifications des circonstances (par exemple
modifications des posologies habituelles des médicaments, émergence de nouveaux mécanismes de résistance).
2.5.3
résistante
R
souche bactérienne inhibée in vitro par une concentration d'un agent antimicrobien qui est associée à une
forte probabilité d'échec thérapeutique
NOTE 1 Les souches bactériennes sont classées «résistantes» en appliquant la concentration critique appropriée dans
un système d'essai phénotypique défini.
NOTE 2 Cette concentration critique peut être modifiée à cause de modifications des circonstances (par exemple
modifications des posologies habituelles des médicaments, émergence de nouveaux mécanismes de résistance).
2.6
souche sauvage
absence de mécanisme de résistance acquis par l'agent antimicrobien pour une souche donnée
2.7
souche de référence
bactérie répertoriée, caractérisée avec des phénotypes et/ou des génotypes de sensibilité antimicrobienne
définis
NOTE Les souches de référence sont conservées comme des cultures mères dont les cultures de travail sont issues.
Elles peuvent être obtenues à partir de collections de culture et utilisées pour le contrôle de la qualité.
2.8 Méthode d'essai de sensibilité
2.8.1
dilution en bouillon
technique dans laquelle les conteneurs sont remplis avec les volumes appropriés d'une solution
antimicrobienne, employant des concentrations de l'agent antimicrobien et des volumes appropriés de
bouillon avec un inoculum défini, qui augmentent de façon incrémentielle (en général de raison 2)
NOTE L'objectif de cette méthode est de déterminer la CMI.
2.8.2
microdilution
réalisation de la dilution en bouillon sur des plaques de microdilution ayant une capacité de u 200 µl par
cupule
2.9
bouillon
milieu liquide utilisé pour la croissance in vitro de bactéries
2.10
inoculum
nombre de bactéries dans une suspension, calculé par rapport au volume final
NOTE L'inoculum est exprimé en unités formant colonie par millilitre (UFC/ml).
2.11
effet de l'inoculum
modification de la CMI liée à une modification de l'inoculum
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3 Modes opératoires
3.1 Généralités
Les essais sont réalisés sur des plaques de microdilution. La méthode est basée sur la préparation de
solutions de travail d'agent antimicrobien dans des volumes de 50 µl (avec l'ajout d'un inoculum également
dans un volume de 50 µl) ou dans un volume de 100 µl (avec l'ajout d'un maximum de 5 µl de volume
d'inoculum) par cupule.
3.2 Milieu
Un bouillon Mueller-Hinton doit être utilisé (voir l'Annexe A pour plus de détails).
3.3 Agents antimicrobiens
3.3.1 Généralités
Les agents antimicrobiens doivent être obtenus directement du fabricant ou de sources commerciales fiables;
les préparations pharmaceutiques à usage clinique ne sont pas acceptables. Les agents antimicrobiens
doivent être fournis avec un numéro de lot, un titre, une date de péremption et des détails concernant les
conditions de stockage recommandées. Sauf recommandation contraire du fabricant, les substances doivent
être conservées dans des conteneurs hermétiquement fermés, dans l'obscurité, à une température de 4 °C
à 8 °C avec un agent hygroscopique. Il convient de préparer les agents hygroscopiques en parties aliquotes,
dont une est utilisée lors de chaque essai.
NOTE Laisser les conteneurs se réchauffer à température ambiante avant de les ouvrir afin d'éviter toute
condensation.
3.3.2 Préparation des solutions mères
L'utilisation d'une balance analytique étalonnée est nécessaire pour peser les agents antimicrobiens. Il doit
être tenu compte du titre de la poudre en utilisant la formule suivante pour obtenir la quantité de substance
d'agent antimicrobien ou le volume de diluant nécessaire pour une solution normalisée:
V×ρ
m= (1)
P
mP×
V= (2)
ρ
où
ρ est la concentration de la solution mère, en mg/l;
m est la masse de l’agent antimicrobien (poudre), en g;
P est le titre de l’agent antimicrobien (poudre), en mg/g;
V est le volume de diluant, en l.
Les concentrations de solutions mères doivent être de 1 000 mg/l ou plus, même si la solubilité de certains
agents est limitée. Les concentrations réelles de solutions mères dépendront de la méthode de préparation de
la solution de travail (dilution en série). Il convient de dissoudre et de diluer les agents dans de l'eau distillée
stérile, sauf indication contraire du fabricant. Certains agents nécessitent d'autres solvants (voir Tableau 1). Il
n'est pas toujours nécessaire de stériliser les solutions. Si nécessaire, la stérilisation doit être effectuée par
filtration sur membrane. Les échantillons avant et après stérilisation doivent être comparés par analyse afin de
garantir qu'aucune adsorption n'est survenue.
4 © ISO 2006 – Tous droits réservés

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ISO 20776-1:2006(F)
Sauf si des informations sur la stabilité des solutions mères dans des conditions de stockage spécifiées sont
disponibles, il convient de les préparer au dernier moment pour chaque lot d'essai.
Tableau 1 — Exemples de solvants et de diluants destinés à fabriquer les solutions mères d'agents
antimicrobiens sélectionnés
Agent antimicrobien Solvant Diluant
Amikacine Eau
Amoxicilline Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Ampicilline Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 8,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Azithromycine Éthanol à une fraction volumique de 95 % ou acide Eau
a
acétique glacial
Azlocilline Eau
Aztréonam Solution saturée de bicarbonate de sodium Eau
Carbénicilline Eau
Céfaclor Eau
Céfamandole Eau
Céfazoline Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Cefdinir Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Eau
Cefditoren Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Eau
Céfépime Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1mol/l, pH 6,0
Céfétamet Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Eau
Céfixime Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 7,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 7,0
Cefmétazole Eau
Céfonicide Eau
Céfopérazone Eau
Céfotaxime Eau
Céfotétan Sulfoxyde de diméthyle Eau
Céfoxitine Eau
Céfpodoxime Solution de bicarbonate de sodium à une Eau
concentration massique de 0,1 %
Céfprozile Eau
Céftazidime Solution saturée de bicarbonate de sodium Eau
Céftibuten 1/10 volume de sulfoxyde de diméthyle Eau
Céftizoxime Eau
b
Céftobiprole Eau, à agiter de manière vigoureuse
Sulfoxyde de diméthyle plus acide acétique glacial
Céftriaxone Eau
Céfuroxime Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Céphalothine Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Eau
Chloramphénicol Éthanol à une fraction volumique de 95 % Eau
Cinoxacine La moitié d'un volume d'eau, volume minimal Eau
1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
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Tableau 1 (suite)
Agent antimicrobien Solvant Diluant
Ciprofloxacine Eau
a
Clarithromycine 0,1 mol/l tampon phosphate, pH 6,5
Méthanol ou acide acétique glacial
Acide clavulanique Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Clinafloxacine Eau
Clindamycine Eau
c
Colistine Eau Eau
d
Dalbavancine Sulfoxyde de diméthyle
Eau et sulfoxyde de diméthyle
Daptomycine Eau Eau
a
Dirithromycine Eau
Acide acétique glacial
Doripénème NaCl à une fraction volumique de 0,85 % NaCl à une fraction volumique de 0,85 %
Doxycycline Eau
Énoxacine La moitié d'un volume d'eau, volume minimal Eau
de 0,1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Értapénème Tampon phosphate 0,01 mol/l, pH 7,2 Tampon phosphate 0,01 mol/l, pH 7,2
Érythromycine Éthanol à une fraction volumique de 95 %) ou acide Eau
a
acétique glacial
Faropénème Eau Eau
Fléroxacine La moitié d'un volume d'eau, volume minimal de Eau
0,1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Acide fusidique Éthanol à une fraction volumique de 95 % Eau
Garénoxacine Eau (agitation)
Gatifloxacine Eau (agitation)
Gémifloxacine Eau
Gentamicine Eau
Imipénème Tampon phosphate 0,01 mol/l, pH 7,2 Tampon phosphate 0,01 mol/l, pH 7,2
Kanamycine Eau
Lévofloxacine La moitié d'un volume d'eau, volume minimal de Eau
0,1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Linézolide Eau
Loracarbef Eau
Mécillinam Eau
Méropénème Tampon phosphate 0,01 mol/l, pH 7,2 Tampon phosphate 0,01 mol/l, pH 7,2
Méthicilline Eau
Mezlocilline Eau
Minocycline Eau
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Tableau 1 (suite)
Agent antimicrobien Solvant Diluant
Moxalactam 0,04 mol/l HCI (laisser reposer pendant 1,5 h à 2 h) Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
e
(sel diammonique)
Moxifloxacine Eau
Mupirocine Eau
Nafcilline Eau
Acide nalidixique La moitié d'un volume d'eau, volume minimal de Eau
0,1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Nétilmicine Eau
Nitrofurantoïne Volume minimal de diméthylformamide pour la Tampon phosphate 0,1mol/l, pH 8,0
dissolution, puis reconstituer le volume total avec
un tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 8,0
Norfloxacine La moitié d'un volume d'eau, volume minimal Eau
1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Ofloxacine La moitié d'un volume d'eau, volume minimal Eau
1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Oxacilline Eau
Pénicilline Eau
Pipéracilline Eau
Polymyxine B Eau Eau
Quinupristine- Eau
dalfopristine
Rifampicine Méthanol Eau
Sparfloxacine Eau
Sulbactam Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Sulphonamides La moitié d'un volume d'eau, volume minimal de Eau
1 mol/l de NaOH pour la dissolution, puis
reconstituer le volume total avec de l'eau
Téicoplanine Eau
Télavancine Sulfoxyde de diméthyle Eau
a
Télithromycine Eau
Acide acétique glacial
Tétracycline Eau
Ticarcilline Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0 Tampon phosphate 0,1 mol/l, pH 6,0
Tigécycline Eau Eau
Tobramycine Eau
Triméthoprime La moitié d'un volume d'eau, volume minimal de Eau
0,1 mol/l d'acide lactique ou 0,1 mol/l d'HCl pour la
dissolution, puis reconstituer le volume total avec
de l'eau
Triméthoprime (lactate) Eau
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Tableau 1 (suite)
Agent antimicrobien Solvant Diluant
Trospectomycine Eau
Vancomycine Eau
NOTE 1 Les informations relatives aux solvants et aux diluants indiqués dans le Tableau 1 sont en grande partie issues du document
[7]
M100-S16 du CLSI (Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Sixteenth Informational Supplement) avec son
autorisation. Ces informations sont soumises à des mises à jour périodiques. Vérifier la dernière version du M100 disponible auprès du
CLSI (anciennement NCCLS), 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087, États-Unis.
NOTE 2 Pour plus d'informations relatives aux exemples de solvants et de diluants pour la préparation de solutions mères d’agents

antimicrobiaux sélectionnés, consulter la pharmacopée européenne ou la pharmacopée des États-Unis.
a
Pour l'acide acétique glacial, utiliser la moitié d'un volume d'eau, puis ajouter l'acide acétique glacial goutte à goutte jusqu'à ce
qu'il soit dissous, pour ne pas dépasser 2,5 mg/l. L'acide acétique glacial équivaut à une fraction de volume d'acide acétique > 99 %.
b
Pour chaque 1,5 mg de ceftobiprole, ajouter 110 µl d'un mélange 10:1 de sulfoxyde de diméthyle et d'acide acétique glacial. Agiter
au vortex vigoureusement pendant 1 min, puis de manière intermittente pendant 15 min. Diluer à 1,0 ml avec de l'eau distillée.
c
La formulation de colistine utilisée dans les essais de sensibilité antimicrobienne est le sulfate de colistine et non pas la colistine
méthane sulfonate (sulphométhate).
d
Il convient de préparer les solutions mères de départ de dalbavancine à des concentrations ne dépassant pas 1 600 mg/l. Il
convient de diluer les concentrations 100× intermédiaires dans du sulfoxyde de diméthyle. Il convient ensuite de réaliser les dilutions
1:100 finales directement dans un bouillon Mueller-Hinton cation-ajusté (BMHCA
...